魚粉是一種重要的蛋白質(zhì)原料，其安全性問題不能忽略，安全重要體現(xiàn)在是否有藥物殘留、是否有毒物質(zhì)殘留等，具體可操作的檢測(cè)指標(biāo)包括魚粉的新鮮度、藥物殘留和衛(wèi)生指標(biāo)等。魚粉的新鮮度差，會(huì)嚴(yán)重降低魚粉是品質(zhì)，甚至喪失飼用價(jià)值。本文著重討論其中的一項(xiàng)鑒定指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)應(yīng)用，以揮發(fā)性鹽基氮含量表示。
揮發(fā)性鹽基氮是指動(dòng)物性食物由于酶和細(xì)菌的作用，在腐敗過程中，使蛋白質(zhì)分解而產(chǎn)生氨以及胺類含氮物質(zhì)，此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，在堿性溶液中蒸出后，用標(biāo)準(zhǔn)酸液滴定從而計(jì)算含量，根據(jù)此原理，在半微量檢測(cè)方法的基礎(chǔ)上改良，使檢測(cè)更簡(jiǎn)易、快捷。
1、試劑
1.1 1%氧化鎂混懸液 分析純氧化鎂1.0g溶于100ml蒸餾水中，振搖成混懸液。
1.2 2%硼酸吸收液 分析純硼酸2g溶于100ml蒸餾水。
1.3 0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液 吸取分析純鹽酸8.3ml，用蒸餾水定容至1000ml，用無水碳酸鈉標(biāo)定。
1.4 0.01ml/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液 用0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋。
1.5 混合指示劑 甲基紅0.1%乙醇溶液，溴甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存三個(gè)月以內(nèi)。
二。實(shí)驗(yàn)所用到的儀器
2.1 上海梅穎浦磁力攪拌器
2.2 型定氮儀
2.3 離心機(jī)
2.4 消化管
2.5 滴定管 zui小分度0.01ml
3、分析步驟
3.1 樣品處理
取10g魚粉于250ml錐形瓶中，加100ml(V總)蒸餾水，于磁力攪拌器上攪拌30min，4000轉(zhuǎn)離心。
3.2 蒸餾滴定
吸取20.0ml2%硼酸吸收液于錐形瓶中，加混合指示劑2~3滴，使KDN-2C型定氮儀的冷凝管末端浸入此溶液。準(zhǔn)確吸取10.0ml(V分)上述樣品清夜于消化管中，加少量蒸餾水沖洗，再加入10ml1%的氧化鎂溶液，蒸餾至150ml(約5min)。吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，溶液由藍(lán)綠色變?yōu)榛壹t色為終點(diǎn)，同時(shí)做試劑空白。
4、計(jì)算
揮發(fā)性鹽基氮(W)以每100g樣品含氮毫克數(shù)表示。
W—樣品中揮發(fā)性鹽基氮的含量，mg/100g
V1—測(cè)定試樣所消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積，ml
V2—試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液體積,ml
C—鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的實(shí)際濃度，mol/L
14—與1.00mL標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液[c(HCl)=1.000mol/L]相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg
m—樣品質(zhì)量，g
結(jié)果的表述：報(bào)告算術(shù)平均值的三位有效數(shù)。
5、允許差
相對(duì)誤差≤10%。
6、影響因素
6.1 時(shí)間
VBN的檢測(cè)反映的是魚粉的腐敗過程所產(chǎn)生的氨以及胺類等堿性含氮物質(zhì)，因此，離心后的樣液應(yīng)馬上檢測(cè)。作者以粗蛋白含量為65%的進(jìn)口秘魯魚粉為例，對(duì)比時(shí)間對(duì)VBN的影響(見表1)。
表1 時(shí)間對(duì)VBN的影響
時(shí)間 VBN(mg/100g)
2h 175
1h 158
0.5h 133
10min 112
5min 106
3min 105
以上表明，試液應(yīng)在5min以內(nèi)進(jìn)行測(cè)定。
6.2 溫度
磁力攪拌過程也要維持一定的溫度，溫度越高，VBN越大，檢驗(yàn)的誤差越大。
表2 溫度對(duì)VBN的影響
溫度 VBN(mg/100g)
20℃ 105
25℃ 108
30℃ 122
32℃ 154
以上表明，磁力攪拌中控制溫度在20~25℃*。
7、其他
7.1 魚粉執(zhí)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)(魚粉GB T19164-2003)的主要技術(shù)參數(shù)(表3)
表3 魚粉GB T19164-2003
項(xiàng)目 指標(biāo)
特級(jí)品 一級(jí)品 二級(jí)品 三級(jí)品
粗蛋白(%) ≥65 ≥60 ≥55 ≥50
揮發(fā)性鹽基氮VBN(mg/100g) ≤110 ≤130 ≤150 ≤150
7.2 本檢測(cè)方法可推廣應(yīng)用至其他的動(dòng)物性蛋白飼料，例如血漿蛋白、血球蛋白等等。
